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查找目的基因時是查找mRNA還是NDA序列

作者:上海捷瑞生物工程有限公司 瀏覽:386 發表時間:2020-04-20 13:04:34


今天我們來聊聊我們的目的基因該如何選擇呢?是選擇DNA序列還是mRNA序列呢,選擇的原則是什麼,let's go


其實簡單來説就是一句話,如果做相對定量,就查找mRNA序列;如果做絕對定量,就查找DNA序列。


  1. 查找mRNA序列。一般目的是這樣的:“我想知道樣本中某幾個基因表達量哪個高些哪個低些”“我對樣品做了處理後想檢測某個基因表達量是否有變化、升高或者降低了多少”。這裏所説的“基因表達量”實際上就是這個基因所對應的mRNA表達量的變化。因為按經典分子生物學理論,基因是指存在於基因組中的DNA,而它要發揮作用,實際上要通過由它轉錄出來的mRNA再翻譯出的蛋白才真正發揮作用。在生物基因組中這個基因的DNA的多少是不變的,但由它所轉錄出來的mRNA的量則不是固定的,可能會有變化。所以,可以近似理解為“基因表達量取決於mRNA有多少”。如果要用PCR的方法檢測mRNA有多少,就要查找mRNA序列,並以此為基礎設計引物。                                     
    同時注意!!!這時的樣品是要準備提取RNA的。在樣本的準備以及保存時就要以RNA的標準來做。可千萬別弄錯了哦

  2. 查找DNA序列。一般目的是這樣的:“我要檢測在一定量的樣本中某個基因有多少個拷貝數”。其中拷貝數(copies)簡單的説就是指某個基因的個數。這裏所説的“基因”是指在DNA水平上的基因組DNA。比如在一定重量的土壤中一些種類比較接近的多種細菌都可能有一個類似的同名基因,則可根據檢測這個基因在單位重量土壤中的數目來推算土壤中這些類細菌的數量。可以近似理解為“想知道有多少個它”。這時就與上文所説的mRNA無關了。所以要查找的是DNA序列,並以此為基礎設計引物。這時的樣品是要準備提取DNA的。在樣本的準備以及保存時就要以DNA的標準來做 




    




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